欢迎光临7500荧光定量PCR仪维修服务中心网站!
诚信促进发展,实力铸就品牌
服务热线:

15021357475

技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > ABI7500Block加热模块带你了解关于定量检测是什么

ABI7500Block加热模块带你了解关于定量检测是什么

发布时间: 2021-08-31  点击次数: 22次
  ABI7500Block加热模块带你了解关于定量检测是什么
  定量检测是一种实时的PCR (qPCR) 检测。测量(定量)每轮PCR扩增循环中,检测目标核酸片段的量。目标分子可以为DNA、cDNA或RNA。此方法指南主要对以下三种定量检测进行讨论:
  DNA/cDNA定量
  采用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的RNA定量
  采用两步法RT-PCR的RNA定量
  定量分析常见术语
  扩增子:PCR过程而产生的DNA短片段
  扩增曲线:根据荧光信号相对于循环数而制作的曲线
  基线:PCR起始时,荧光信号还未发生变化的几个循环
  Ct(阈值循环):荧光信号超过NTC(无模板对照样品)固定阈值时的循环数 。用于对扩增质量进行验证。
  核酸目标:(也称为“目标模板”)——需要扩增的DNA或RNA序列
  惰性参比染料: 一种可作为内部对照,以用于在数据分析时对报告基团染料信号进行均一化的染料。均一化是对因浓度或体积变化而随之引起波动进行的必要校正。所有的SDS PCR试剂盒都提供了参比荧光对照。
  Rn(均一化报告基团):报告基团染料释放的荧光强度除以惰性参比染料释放的荧光强度
  Rn+: 一次反应的Rn值包含所有的组分,包括模板
  Rn-:未反应样品的Rn值。Rn值可通过以下方式获取:
  实时荧光定量PCR (qPCR) 运行的早期循环(产生可被检测的荧光信号之前的循环),或
  不含有任何模板的反应
  ΔRn (delta Rn): 在特定PCR条件设置下所产生的信号量级。
  ΔRn可通过以下公式计算:(Rn+) – (Rn-)标准品 具有已知浓度的A样本,用于绘制标准曲线。通过使用不同浓度的标准品,您可构建用于未知样品定量分析的标准曲线。
  阈值:早期PCR循环时Rn值的平均标准差,乘以相应的校正系数阈值应当设定在PCR指数扩增时的相关区域。
  未知:具有未知模板量的样品。即,您需要进行检测的样品。
  实时PCR (qPCR) 定量检测工作原理
  在PCR的起始循环中,荧光信号几乎不发生变化。从而定义为扩增曲线中的基线。而超出基线部分的荧光的增加,则为对累计目标分子的检测。固定的荧光阈值线,可设置在基线之上。荧光超过固定阈值时的循环数则为参数CT(阈值循环)。

联系我们

contact us

咨询电话

扫一扫,关注我们

返回顶部