ABI7500Block加热模块带你了解关于定量检测是什么

　　ABI7500Block加热模块带你了解关于定量检测是什么

　　定量检测是一种实时的PCR (qPCR) 检测。测量（定量）每轮PCR扩增循环中，检测目标核酸片段的量。目标分子可以为DNA、cDNA或RNA。此方法指南主要对以下三种定量检测进行讨论：

　　DNA/cDNA定量

　　采用一步法逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）的RNA定量

　　采用两步法RT-PCR的RNA定量

　　定量分析常见术语

　　扩增子：PCR过程而产生的DNA短片段

　　扩增曲线：根据荧光信号相对于循环数而制作的曲线

　　基线：PCR起始时，荧光信号还未发生变化的几个循环

　　Ct（阈值循环）：荧光信号超过NTC（无模板对照样品）固定阈值时的循环数 。用于对扩增质量进行验证。

　　核酸目标：（也称为“目标模板”）——需要扩增的DNA或RNA序列

　　惰性参比染料： 一种可作为内部对照，以用于在数据分析时对报告基团染料信号进行均一化的染料。均一化是对因浓度或体积变化而随之引起波动进行的必要校正。所有的SDS PCR试剂盒都提供了参比荧光对照。

　　Rn（均一化报告基团）：报告基团染料释放的荧光强度除以惰性参比染料释放的荧光强度

　　Rn+: 一次反应的Rn值包含所有的组分，包括模板

　　Rn-：未反应样品的Rn值。Rn值可通过以下方式获取：

　　实时荧光定量PCR (qPCR) 运行的早期循环（产生可被检测的荧光信号之前的循环），或

　　不含有任何模板的反应

　　ΔRn (delta Rn): 在特定PCR条件设置下所产生的信号量级。

　　ΔRn可通过以下公式计算：(Rn+) – (Rn-)标准品 具有已知浓度的A样本，用于绘制标准曲线。通过使用不同浓度的标准品，您可构建用于未知样品定量分析的标准曲线。

　　阈值：早期PCR循环时Rn值的平均标准差，乘以相应的校正系数阈值应当设定在PCR指数扩增时的相关区域。

　　未知：具有未知模板量的样品。即，您需要进行检测的样品。

　　实时PCR (qPCR) 定量检测工作原理

　　在PCR的起始循环中，荧光信号几乎不发生变化。从而定义为扩增曲线中的基线。而超出基线部分的荧光的增加，则为对累计目标分子的检测。固定的荧光阈值线，可设置在基线之上。荧光超过固定阈值时的循环数则为参数CT（阈值循环）。