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qPCR软件报错,荧光定量pcr仪报错,怎么解决?

发布时间: 2021-11-12  点击次数: 397次

qPCR软件报错了?别慌,这篇文章会给你答案!

在运行qPCR实验或分析数据时,有时候会遇到软件报错,小编在这里列举了Applied BiosystemsTM 品牌仪器软件的常见报错,分析了可能的原因和解决办法,如果您正在使用我们的仪器,希望本文能给您提供一些解决软件报错问题的思路。



一、通用报错(多款机型软件均可能出现)

1. 打开数据分析软件报错:java.lang.IIIegalArgumentException: One of the raw spectra is null。点击OK接受后,扩增曲线是空白(如图stepone plus软件)。


问题分析:

可能是单次数据异常,导致校正文件丢失。在软件上点击Analysis  > override calibration > Use another calibration file 下选择同仪器相同类型实验文件做校正 ,重新分析后可以恢复正常数据。出现该报错的原因可能是双击了start run, 或者分析/保存数据过程被中断,例如分析/保存过程中关闭软件或拔出U盘。

2. 打开数据分析软件报错:Analysis cannot proceed: not enough sample definded(如图stepone plus软件,此报错仅限stepone,stepone plus,7300 plus,7500 v2.0以上版本软件)。

问题分析:

plate setup步骤未给样品孔设置sample信息,设置好sample信息后重新分析,数据可以恢复正常。


3. 打开数据分析软件报错:Analysis cannot proceed: not enough targets definded(如图stepone plus软件,此报错仅限stepone,stepone plus,7300 plus,7500 v2.0以上版本软件)。




问题分析:

plate setup步骤未给样品孔设置target信息,设置好target信息后重新分析,数据可以恢复正常。




4. 打开数据分析软件报错:Analysis failed due to: GExSession doesn't exist in context。点击OK  接受后,扩增曲线是空白(如图stepone plus软件)。





问题分析:

扩增循环阶段未采集信号,需要打开信号收集标识。






5. 在多重反应程序设置中,给样品孔添加ROX作为reportor 的探针时,报错:Dye "ROX" already used in passive reference(如图Q5软件)。




问题分析:

仪器默认passive reference选择ROX作为参比荧光,如果实验中ROX是作为探针的报告基团,则需要将passive reference改成None,之后就可以在target设置中选择ROX作为探针了。


6. 打开数据分析软件报错:The selected file cannot be opened, cannot open the file because file contents are not recognized(如图Q5软件)。






问题分析:

可能的原因包括: 

1. 通过导入文件(import plate setup)在实验中添加了重复的样本,使用了相同的sample name,建议编辑样品名称时不要使用相同的sample name 命名样品。

2. 实验名称包含不合要求的字符,例如空格,括号等,建议实验名称不要使用不符要求的字符。

3. 文件受损,数据不完整,建议仪器运行过程中不要操作软件。

4. 拷贝数据的U盘有故障,导致拷贝数据不完整,建议更换U盘重新拷贝数据。


二、7500报错


1. 运行程序时报错:1404  Hold duration too short for read。




问题分析:

数据采集时间太短,PCR循环阶段data collection step 时间设置不小于31秒,melt curve 阶段data collection step请勿修改。



2. 运行程序时报错:Java Platform SE Binary has stopped working,实验中断。






问题分析:

如果通过直接双击已保存的edt模板文件去运行实验程序,可能会出现报错。建议先打开7500软件,通过New Experiment > From Template导入edt文件进行实验。



3. 点击start run时报错"The instrument type for the experiment is not compatible with the connected instrument"。






问题分析:

实验中选择的仪器类型与实际使用的仪器不符,需要到Setup界面重新修改为正确的仪器类型。







4. 程序设置报黄色提醒 "number of data collection points is not valid"




问题分析:

运行程序设置了多个信号采集点,定量实验中只能设置一个信号采集点,可以设置在cycling stage 。



5. eds文件导入PTS软件,报错"cannot import any experiment file(s) because of the following error(s): "








问题分析:

使用7500 v2.4版本软件产生的数据与PTS软件不兼容,可以将eds数据先用7500 v2.3的软件打开,分析后保存,然后再导入PTS软件。

三、Q3/5报错


1. 数据打开后扩增曲线是空白,点击Analyze分析后报错:The analysis cannot proceed because the experiment is missing required plate setup information. Go to 'Define' and 'Assign' page to creat and assign targets and samples. 点击OK接受后,扩增曲线仍是空白。





问题分析:

plate setup步骤未给样品孔设置target或者sample name信息,设置好target或者sample name信息后重新分析,数据可以恢复正常。



2. 运行PTS实验报错:Star run validation: The filter set has not been selected for following target: ROX(x4-m4)。



问题分析:

含melt curve的实验程序中,软件默认melt curve filter只选择X1M1,PTS实验需要从软件进入Method-action-optical filter settings, 在melt curve filter选项中将x4m4选中(Q5也可以尝试x1m3)。



3. 打开数据分析软件报错:Analysis failed due to insufficient data。


问题分析:

1.4.3之前版本的软件有bug, 部分染料法实验结果扩增曲线是空白,解决方法是在analysis setting 点击apply,即可恢复正常显示。1.4.3之后的软件版本无此问题。




四、stepone/stepone plus 报错


1. 开始运行实验前报错:You must first download experiment"XXX"before you can start another run on  this instrument.  

问题分析:

上次运行实验没有正常传输到电脑端,需先将上次实验数据下载到电脑然后才能开始运行。在软件上点击Instrument > Download Experiment from Instrument下载数据后,即可重新开始运行试验。





2. 打开数据点击analyze分析软件报错:Cannot calculate Pure Dye Matrix。



问题分析:

该报错指示运行结果文件中有原始数据丢失,可能是实验程序没有运行结束或在运行过程中被终止所导致。例如客户将反应程序最后一步设置为infinite holding stage,最后通过点击STOP结束程序容易导致该问题。针对这样的数据,可以联系技术支持寻求帮助。



3. 查看熔解曲线时出现黄色报错:No derivative curve for all selected wells due to excessive noise in fluorescence data.




问题分析:

熔解曲线程序设置错误,如下图中数据误删掉了60度的步骤,设成了95度升温到95.3度。建议使用SYBR Green染料法做实验时,不要修改熔解曲线步骤,使用仪器默认程序即可。




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