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实时荧光定量PCR仪通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法

发布时间: 2022-01-22  点击次数: 90次
  实时荧光定量PCR仪的技术是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
  PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的,随着反应循环数的增加,PCR反应不再以指数方式生成模板,从而进入平台期。在传统的PCR 中,常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的扩增产物,因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。
  在实时荧光定量PCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号,随着反应时间的进行,监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和zui终的平台期,因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此来推断模板zui初的含量。
  荧光定量PCR仪,是指通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监测反应过程的仪器。结合相应的软件可以对产物进行定性和定量分析,计算待测样品模板的初始浓度。在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。
  通过标准曲线对未知模板进行定量分析,包括TaqMan荧光探针和SYBR荧光染料。PCR能对特定基因或种的丰度进行相对定量,比较不同处理或样品间的差异,如基因拷贝数、表达量来研究基因表达对处理的响应,同时可以获得PCR扩增效率等信息。

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