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荧光定量PCR检测结果判读其实很简单

发布时间: 2022-04-18  点击次数: 20次
  荧光定量PCR检测结果判读其实很简单
  定光定量PCR技术已经有超过20年的发展历史,如今广泛应用在基础科研、病原微生物核酸检测,转基因检测等领域。近期疫情爆发,核酸分子检测在诊断中发挥重要作用,该技术也逐渐被大众所了解。
  既往结果判读的挑战:
  作为感染确诊的金标准的荧光定量PCR检测技术,对于检测结果的的判读一定需要长期专业的训练。其挑战如下:
  l 操作人员需要具备较好分子生物学知识及相关操作技能
  l 仪器的操作与维护需要专业的维护
  l 光路需要定期矫正,光源衰减,信号稳定性下降
  l 软件上需要设置和调节的步骤也比较多
  如今结果判读的改善:
  随着仪器与软件的进步,以上的众多问题逐步得到改善和解决,如今诸如病毒核酸检测的解决方案已变得比较便捷。
  为了一次检测多个病原体或者一个病原体的多个基因,常常采用多种不同的荧光染料来标记不同的分子探针,进行多重检测。当分子探针识别出特异性目的基因片段并且结合上去,在DNA聚合酶水解的作用下释放出荧光染料,检测其荧光染料的信号有无就可获知样品中是否有目的基因的存在。检测PCR反应溶液中的不同的荧光信号就成了判断样品中是否有特异性目的基因的标准,也就是是否有目标病原体的标准。市面上绝大多数的核酸检测试剂盒就是采用这种多重检测的方式。
  l 商品试剂盒的推出和普及降低了操作人员的要求
  l 仪器的硬件改进,多采用LED长寿命高强度光源,稳定性增加
  l 软件的界面的更加友好,包括中文化及判读结果的简单化
  三重检测试剂盒为例,进行样本测试后的结果判读
  一个探针用于检测正常人体的内标基因,另外两个探针用于检测特异性的基因,检测结果判读简单明了:对于一个样品来说,如果软件分析界面上出现三条扩增曲线那么就是阳性结果,两条扩增曲线是可疑结果,一条扩增曲线是阴性结果。

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